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基于多成分药物代谢的枸杞子质控成分遴选研究


   摘要 目的:基于多成分序贯代谢的研究策略,探讨枸杞子在体内的代谢成分,遴选枸杞子的质控成分。方法:制备枸杞子水提液后,运用在体双向肠灌流技术和灌胃采血技术收集其肠代谢、肝代谢及综合代谢样品,结合超高效液相色谱-四级杆/静电场高分辨质谱联用技术(UPLC-Q-Exactive MS),对枸杞子水提物、肠代谢样品、肝代谢样品及综合代谢样品中的成分进行鉴别,遴选枸杞子的质控成分。结果:枸杞子提取物经LC-MS分析,共鉴定出36个化学成分。序贯代谢研究表明,枸杞子中有20个原形入血成分,其中有17个成分在经过肠代谢后可以检测到,16个成分在经过肝代谢后可以检测到,11个成分经过灌胃给药后,在腹主动脉血中可以检测到。结论:根据序贯代谢的研究结果,可以将这11个成分作为枸杞子药材的候选指标性成分,其分别为咖啡酸己糖偶联物、香豆酸己糖偶联物、N-caffeoyl,N′-dihydrocaffeoyl spermidine dihexose、绿原酸、N1,N10-bis(dihydrocaffeoyl)spermidine hexose、香豆素、槲皮素-O-芸香糖苷、阿魏酸、芦丁、N-乙酰色氨酸、水杨酸。
  关键词 枸杞子;序贯代谢;多成分药物代谢;质控成分;质量控制
  Abstract Objective:In order to select the quality control components,and explore the metabolic components of Fructus Lycii in vivo,based on the research strategy of multicomponent sequential metabolism.Methods:After preparing the water extract of Fructus Lycii,in-vivo two-way intestinal perfusion technology and intragastric blood collection technology were used to collect its intestinal metabolism,liver metabolism and comprehensive metabolism samples,combined with ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole/electrostatic field high-resolution mass spectrometry Technology(UPLC-Q-Exactive MS),to identify the ingredients in the water extract of wolfberry,intestinal metabolism samples,liver metabolism samples and comprehensive metabolism samples,and select the quality control components of Fructus Lycii.Results:A total of 36 chemical components were identified by LC-MS analysis of Fructus Lycii extract.Sequential metabolic studies have shown that there were 20 protoplasmic components in Fructus Lycii,of which 17 components could be detected after intestinal metabolism,16 components could be detected after intestinal metabolism followed by liver metabolism,and 11 components could be detected in comprehensive metabolic samples after intragastric administration.Conclusion:According to the results of sequential metabolism,these 11 elements can be used as quality control components of Fructus Lycii,including caffeic acid hexose conjugate,coumaric acid hexose conjugate,N-caffeoyl,N′-dihydrocaffeoyl spermidine dihexose,chlorogenic acid,N1,N10-bis(dihydrocaffeoyl)spermidine hexose,coumarin,quercetin 3-O-rutinoside,ferulic acid,rutin,N-acetyltryptophan,andsalicylic acid.
  Keywords Fructus Lycii; Sequential metabolism; Multicomponent drug metabolism; Quality control ingredients; Quality control
  中圖分类号:R284.1文献标识码:Adoi:10.3969/j.issn.1673-7202.2020.13.004
  枸杞子是一味名贵的药食同源中药材,其为茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实,具有滋肾,润肺,补肝,明目等功效[1]。现代植物化学分析表明,枸杞中主要含有多糖、黄酮、氨基酸、多酚和生物碱等化合物[2]。2015年版《中华人民共和国药典》中将枸杞多糖(以葡萄糖计)和甜菜碱作为含量测定项下的质控标准。虽然枸杞多糖和甜菜碱的药理活性已被大量文献报道和证实[3],但这不足以反映枸杞子多成分多功效的特性和全面评价枸杞子药材的品质。多成分药物发挥药效是多种成分面对多个靶点的综合作用[4],这些成分到达靶点的代谢过程决定了它们产生疗效的可能性,因此天然多成分药物的多种成分代谢动态过程研究已经发展成为一个热点科研方向。基于此,本研究运用课题组前期开发的序贯代谢的研究策略[5],系统描绘了枸杞子提取物口服给药后多成分动态吸收和代谢的变化轮廓,并获得其血中移行成分,为其质控成分的遴选和质量标准的提升提供依据。

        
  1 材料与方法
  1.1 材料
  1.1.1 动物 SD雄性大鼠,SPF级,体质量约(200~250)g,购自斯贝福(北京)生物技术有限公司,实验动物生产许可合格证号:SCXF(京)2016-0002,并已通过北京中医药大学伦理部的伦理审批(伦理审批号:BUCM-4-2019060515-1028)。实验前将大鼠置于昼夜节律光照条件下,自由进食进水,适应性饲养7 d。
  1.1.2 药物 枸杞子药材由宁夏百瑞源枸杞股份有限公司提供,经北京中医药大学王晶娟副教授鉴定为宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实。绿原酸对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110753-201817),咖啡酸对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110885-201703),芦丁对照品(中国食品药品检定研究院,批号:100080-201811),甜菜碱对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110894-201604),原儿茶醛对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110810-201608),儿茶素对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110877-201604),阿魏酸对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110773-201614),表兒茶素对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110878-201703)。
  1.1.3 试剂与仪器 固相萃取柱(美国Waters公司,型号:OASIS PRIME HLB Cartridge),娃哈哈纯净水,甲醇、乙腈为色谱级,其余试剂均为分析纯超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用仪(赛默飞世尔科技,美国,型号:UltiMate 3000-Q-Orbitrap),包括UltiMate 3000超高效液相色谱仪、Q-Exactive四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱仪、DAD检测器、Xcalibur质谱工作站;电子分析天平(Sartorius公司,德国,型号:BSA2202S);电子分析天平(Sartorius公司,德国,型号:BSA124S);超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司,型号:KQ5200E);电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司,型号:HH-2A);高速离心机(北京白洋医疗器械有限公司,型号:BY-400C);水浴氮吹仪(北京成萌伟业科技有限公司,型号:CM-12);蠕动泵(保定兰格恒流泵有限公司,型号:BT-100-1F)。
  1.2 方法
  1.2.1 分组 将大鼠分为肠代谢手术组、肝代谢手术组与综合代谢手术组。
  1.2.2 给药方法 1)枸杞子水提液制备:称取枸杞子药材1.02 g,加入100 mL蒸馏水回流1 h,过0.22 μm滤膜过滤,弃去初滤液,即得。2)肠代谢手术组:取4只禁食12 h大鼠(不禁水),腹腔麻醉,腹主动脉采血置于预先涂抹肝素钠的离心管中。收集的血液置于37 ℃水浴中,用于补充手术鼠实验过程中损失的血液。另取一只同样禁食大鼠腹腔麻醉,小心剖离颈静脉,插管。管的另一端通过蠕动泵连接到刚刚取出的血液中。沿腹中线剪开腹腔,选取空肠段约10 cm作为供试肠段,结扎实验用肠段以外的血管。37 ℃生理盐水缓慢冲出肠内容物,至流出液澄清,继续充入空气将生理盐水排净。注射泵与肠段进口端相连,灌流(0.2 mL/min)一定量枸杞子水提液(1 g/mL)。用37 ℃生理盐水润湿的纱布覆盖在裸露肠段上,保温灯加热。结扎肝门静脉及旁支有干扰的细血管,同时开启蠕动泵,进行颈静脉输血(流速0.3 mL/min),肠系膜静脉采血。连续采血2 h,平行操作3组。空白组给药生理盐水,其余操作相同。3)肝代谢手术组:不结扎肝门静脉,在股静脉处采血,其余操作同“肠代谢手术组”。4)综合代谢手术组:选取12只SD大鼠,将大鼠随机分为四组,每3只为1组,灌胃给与枸杞子水提液(1 g/mL),各组分别于0.5 h、1 h、1.5 h、2 h用10%水合氯醛腹腔注射进行麻醉处理,于腹主动脉处采集血液样品。空白组灌胃给与等量生理盐水,其余操作相同。
  1.2.3 检测指标与方法 1)对照品溶液制备:分别精密称取上述8个对照品适量,加适量甲醇完全溶解后稀释至浓度约为10 ng/mL,0.22 μm滤膜过滤,取续滤液即得各化合物的对照品溶液。2)血浆样品前处理:1.5 mL血浆样品+1.5 mL 4%磷酸,涡旋1 min,放置5 min后3 mL全部上样固相萃取柱,接收的流出液标为1;再用5%甲醇1 mL进行清洗,接收流出液标为2;最后用90:10的乙腈:甲醇1 mL进行洗脱,用另一个离心管接收流出液并标为3;在洗脱过程中尽量降低流速使其成滴流下,将洗脱液3过0.22 μm滤膜,进行LC-MS分析。空白血浆处理方法除将1.5 mL血浆样品换成1.5 mL空白血浆外,其余操作步骤一致。3)测定条件:液相条件:色谱柱:CORTECS UPLC T3(100 mm×2.1 mm,1.6 μm);流速:0.3 mL/min;流动相:0.1%甲酸(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~1 min,95%→95% A;1~20 min,95%→5% A;20~21 min,5%→5% A;21~21.1 min,5%→95% A;21.1~22 min,95%→95% A);进样体积:2 μL;检测波长:190~400 nm(DAD检测器);柱温:40 ℃;质谱条件:电喷雾电离源(HESI源);正、负离子检测模式;扫描范围:100~1 500 Da;喷雾电压:+3.5 kV(正离子模式),+3.0 kV(负离子模式);鞘气体积流量:35 arb;辅助气体积流量:10 arb;辅助气温度:250 ℃;离子传输管温度:300 ℃;扫描模式:Full MS/dd-MS2,Full MS分辨率为70 000,dd-MS2分辨率为17 500;碰撞能为:20、30、40 eV。4)数据处理及代谢物鉴定:通过精确相对分子质量及二级碎片离子信息,与对照品的保留时间、mzVault 2.0质谱数据库、HMDB数据库及相关文献报道数据比对,对枸杞子水提液及代谢样品中的成分进行鉴定。

  
  2 结果
  2.1 枸杞子水提液中化学成分鉴定
  枸杞子水提液的总离子流图(TIC图)。见图1,共鉴定出36个化学成分,其中3个单糖类化合物、7个有机酸类化合物、10个生物碱类化合物、6个黄酮类化合物、2个苯丙素类化合物、2个氨基酸类化合物、1个花色苷类化合物、1个蒽醌类化合物和4个其他类化合物,结果见表1,具体分析如下:
  化合物1 一级质谱分子离子峰为m/z 326.124 7[M-H]-,软件给出的精确分子式为C15H21NO7(Error in ppm为1.272),其二级特征碎片离子为m/z 167,通过与文献[6]对比推测化合物1为(Dihydrocoumaroyl Glucoside)amide。
  化合物2 一级质谱分子离子峰为m/z 251.138 7[M+H]+,软件给出的精确分子式为C13H18N2O3(Error in ppm为-0.319),二级质谱中存在碎片离子m/z 234[M+H-NH3]+、m/z 163[M+H-C4H12N2]+、m/z 89[M+H-C9H6O3]+,m/z 163为咖啡酰离子碎片,m/z 89为腐胺离子碎片,通过与文献[7]对比,推测化合物2为咖啡酰腐胺。
  化合物3 一级质谱分子离子峰为m/z 299.077 2[M-H]-,软件给出的精确分子式为C13H16O8(Error in ppm为1.056),二级质谱中存在丢失一分子葡萄糖基的特征碎片离子m/z 137[M-H-162]-,通过与文献[8]对比,推测该化合物为Salicylic acid-glucoside。
  化合物4 一级质谱分子离子峰为m/z 341.087 8[M-H]-,软件给出的精确分子式为C15H18O9(Error in ppm为1.091),二级质谱中存在碎片离子m/z 179[M-H-C6H11O5]-、m/z 179[M-H-C6H11O5-CO2]-,m/z 179为丢失己糖后产生的咖啡酸离子碎片,与文献[9]给出的碎片离子相同,推测该化合物为咖啡酸己糖偶联物。
  化合物5 保留时间为4.00 min,一级质谱分子离子峰为m/z 137.023 2[M-H]-,通过与原儿茶醛对照品保留时间和质谱数据对比,确定该化合物为原儿茶醛。
  化合物6 一级质谱分子离子峰为m/z 693.369 6[M+H]+,二级碎片离子有m/z 455、m/z 384、m/z 293、m/z 222,与文献[10]给出的碎片离子相同,推测该化合物为tris(Dihydrocaffeoyl)Spermine。
  化合物7 一级质谱分子离子峰为m/z 325.092 9[M-H]-,软件给出的精确分子式为C15H18O8(Error in ppm为1.106),二级碎片离子有m/z 163[M-H-162]-、m/z 145[M-H-162-H2O]-,与文献[7]给出的碎片离子相同,推测该化合物为草木樨苷。
  化合物8 一级质谱分子离子峰为m/z 531.317 4[M+H]+,软件给出的精确分子式为C28H43N4O6(Error in ppm为-0.571),二级碎片离子有m/z 293、m/z 222、m/z 165,与文献[10]报道的碎片离子相同,推测该化合物为N1,N14-bis-(dihydrocaffeoyl)Spermine(Kukoamine A)。
  化合物9 一级质谱分子离子峰为m/z 343.103 5[M-H]-,软件给出的精确分子式为C15H20O9(Error in ppm为1.141),二级碎片离子有m/z 181[M-H-162]-、m/z 137[M-H-162-CO2]-,通过与文献[6]比较推测该化合物为Homovanillic acid hexose。
  化合物10 保留时间为4.54 min,一级质谱分子离子峰为m/z 289.071 4[M-H]-,软件给出的精确分子式为C15H14O6(Error in ppm为0.735),通过与儿茶素对照品保留时间和质谱数据对比,确定该化合物为儿茶素。
  化合物11 一级质谱分子离子峰为m/z 796.348 2[M+H]+,软件给出的精确分子式为C37H53N3O16(Error in ppm为-1.659),二级碎片离子有丢失一分子糖基和丢失两分子糖基的碎片离子m/z 634[M+H-162]+、m/z 472[M+H-162-162]+,与文献[10]报道的碎片离子相同,推测该化合物为N-caffeoyl,N′-dihydrocaffeoyl spermidine dihexose。
  化合物12 保留时间为4.78 min,一级质谱分子离子峰为m/z 353.087 8[M-H]-,软件给出的精确分子式为C16H18O9(Error in ppm为1.091),通过与绿原酸对照品保留时间和質谱数据对比,确定该化合物为绿原酸。
  化合物13 一级质谱分子离子峰为m/z 353.102 0[M+H]+,软件给出的精确分子式为C16H18O9(Error in ppm为-0.359),二级特征碎片离子为m/z 163,为咖啡酰碎片离子。通过与mzVault 2.0质谱数据库进行比较,发现裂解规律相同,故确定该化合物为1-咖啡酰奎宁酸。
  化合物14 一级质谱分子离子峰为m/z 325.092 9[M-H]-,软件给出的精确分子式为C15H18O8(Error in ppm为1.106),二级质谱中存在碎片离子m/z 163[M-H-162]-、m/z 119[M-H-162-CO2]-,m/z 163为丢失糖基后产生的香豆酸碎片离子,根据文献[9]推测该化合物为香豆酸己糖偶联物。

     
 化合物15 一级质谱分子离子峰为m/z 636.312 1[M+H]+,二級特征碎片离子有m/z 474[M+H-162]+和m/z 222[M+H-162-dihydrocaffeoyl-C4H12N2]+,与文献[10]报道的相同,推测该化合物为N1,N10-bis(dihydrocaffeoyl)spermidine hexose。
  化合物16 一级质谱分子离子峰为m/z 634.298 7[M-H]-,软件给出的精确分子式为C31H45N3O11(Error in ppm为2.624),二级碎片离子有m/z 427、m/z 350、m/z 308,其裂解规律和文献报道[11]相同,推测该化合物为N,N-bis-dhc-spermidine-Hex。
  化合物17 一级质谱分子离子峰为m/z 771.198 7[M-H]-,软件给出的精确分子式为C33H40O21(Error in ppm为1.084),二级碎片离子有丢失一分子糖基的m/z 609[M-H-162]-,根据文献[11]推测该化合物为quercetin-O-Rut-Hex。
  化合物18 保留时间为5.505 min,一级质谱分子离子峰为m/z 179.034 1[M-H]-,软件给出的精确分子式为C9H8O4(Error in ppm为1.200),通过与咖啡酸对照品保留时间和质谱数据对比,确定该化合物为咖啡酸。
  化合物19 一级质谱分子离子峰为m/z 632.282 7[M-H]-,软件给出的精确分子式为C31H43N3O11(Error in ppm为2.079),二级碎片离子有m/z 470[M-H-162]-,结合文献报道[11],推测该化合物为dhc-caffeoyl-spermidine-Hex。
  化合物20 一级质谱分子离子峰为m/z 474.259 4[M+H]+,软件给出的精确分子式为C25H36N3O6(Error in ppm为-1.565),二级碎片离子有m/z 236、m/z 222、m/z 165、m/z 123,结合文献报道[10],推测该化合物为N1,N10-bis-(dihydrocaffeoyl)spermidine。
  化合物21 一级质谱分子离子峰为m/z 472.245 5[M-H]-,软件给出的精确分子式为C25H35N3O6(Error in ppm为2.240),二级特征碎片离子有m/z 308,是二氢咖啡酰的碎片离子,与文献[6]报道相同,推测该化合物为bis(dihydrocaffeoyl)spermidine。
  化合物22 一级质谱分子离子峰为m/z 470.229 8[M-H]-,软件给出的精确分子式为C25H33N3O6(Error in ppm为2.240),二级碎片离子m/z 308为二氢咖啡酰的碎片离子,结合文献报道[11],推测该化合物为dhc-caffeoyl spermidine isomer。
  化合物23 一级质谱分子离子峰为m/z 355.103 5[M-H]-,软件给出的精确分子式为C16H20O9(Error in ppm为3.214),二级质谱中存在特征碎片离子m/z 193[M-H-162]-,m/z 175[M-H-162-H2O]-,与文献[7]报道相同,推测化合物23为阿魏酸-O-葡萄糖苷。
  化合物24 一级质谱分子离子峰为m/z 470.228 1[M+H]+,软件给出的精确分子式为C25H32N3O6(Error in ppm为-1.004),二级质谱中存在碎片离子m/z 308[M+H-162]+、m/z 291[M+H-162-NH3]+、m/z 291[M+H-162-NH3-71]+,同时存在咖啡酰碎片离子峰m/z 163,与文献[7]报道相同,推测该化合物为N1,N10-二咖啡酰亚精胺。
  化合物25 一级质谱分子离子峰为m/z 147.043 8[M+H]+,软件给出的精确分子式为C9H6O2(Error in ppm为-1.673),其二级特征碎片离子为m/z 119,为分子离子丢失一分子羰基所得,与文献[7]报道相同,推测化合物为香豆素。
  化合物26 一级质谱分子离子峰为m/z 163.039 2[M-H]-,软件给出的精确分子式为C9H8O3(Error in ppm为1.530),其二级特征碎片离子为m/z 119,为分子离子丢失一分子羰基所得,与文献[7]报道相同,推测该化合物为对香豆酸。
  化合物27 一级质谱分子离子峰为m/z 609.146 3[M-H]-,软件给出的精确分子式为C27H30O16(Error in ppm为2.116),二级碎片离子有m/z 301[M-H-308]-,m/z 271和m/z 255是槲皮素的特征碎片,与文献[11]报道相同,推测化合物27为槲皮素-O-芸香糖苷。
  化合物28 一级质谱分子离子峰为m/z 303.049 6[M+H]+,软件给出的精确分子式为C15H10O7(Error in ppm为-2.010),与mzVault 2.0质谱数据库中的槲皮素的裂解规律相同,推测化合物28为槲皮素。
  化合物29 一级质谱分子离子峰为m/z 465.102 6[M+H]+,软件给出的精确分子式为C21H20O12(Error in ppm为-0.328),与mzVault 2.0质谱数据库中的金丝桃苷的裂解过程相同,推测化合物29为金丝桃苷。
  化合物30 保留时间为6.59 min,一级质谱分子离子峰为m/z 195.065 1[M+H]+,软件给出的精确分子式为C10H10O4(Error in ppm为-0.437),特征二级碎片离子有m/z 177[M+H-H2O]+,m/z 145[M+H-H2O-CO]+,通过与阿魏酸对照品保留时间和质谱数据对比,确定该化合物为阿魏酸。

       
  化合物31 一级质谱分子离子峰为m/z 609.145 9[M-H]-,軟件给出的精确分子式为C27H30O16(Error in ppm为1.459),有二级碎片离子m/z 300、m/z 271、m/z 178、m/z 151,通过与芦丁对照品保留时间和质谱数据对比,确定该化合物为芦丁。
  化合物32 一级质谱分子离子峰为m/z 245.093 0[M-H]-,软件给出的精确分子式为C13H14N2O3(Error in ppm为3.799),二级质谱中的碎片离子有m/z 203[M-H-CH2CO]-,m/z 116、m/z 98、m/z 74,与文献[7]报道相同,推测该化合物为N-乙酰色氨酸。
  化合物33 一级质谱分子离子峰为m/z 203.082 6[M-H]-,软件给出的精确分子式为C11H11N2O2(Error in ppm为5.544),二级质谱中的碎片离子有m/z 186[M-H-NH3]-、m/z 159[M-H-CO2]-、m/z 142[M-H-CO-NH3]-和m/z 116[M-H-CO-NH3-C2H2]-,与文献[7]报道相同,推测该化合物为色氨酸。
  化合物34 一级质谱分子离子峰为m/z 593.165 2[M-H]-,软件给出的精确分子式为C27H30O15(Error in ppm为2.366),二级特征碎片离子为丢失一分子芸香糖苷后的碎片离子m/z 285[M-H-308]-,与文献[7]报道相同,推测该化合物为山柰酚芸香苷。
  化合物35 一级质谱分子离子峰为m/z 623.162 3[M-H]-,软件给出的精确分子式为C28H32O16(Error in ppm为2.630),二级特征碎片离子有丢失一分子芸香糖苷的碎片离子m/z 315[M-H-308]-,与文献[7]报道相同,推测该化合物为矮牵牛素-3-O-芸香苷。
  化合物36 一级质谱分子离子峰为m/z 137.023 3[M-H]-,软件给出的精确分子式为C7H6O8(Error in ppm为-0.153),二级碎片离子存在m/z 93[M-H-CO2]-,与文献[7]报道相同,推测该化合物为水杨酸。
  2.2 枸杞子代谢成分鉴定
  通过经过对各血浆样品进行LC-MS分析,并与水提物进行对比发现各部位的原形入血成分,结果见表2。咖啡酸己糖偶联物、香豆酸己糖偶联物、N-caffeoyl,N′-dihydrocaffeoyl spermidine dihexose、绿原酸、N1,N10-bis(dihydrocaffeoyl)spermidine hexose、槲皮素-O-芸香糖苷、阿魏酸、芦丁、N-乙酰色氨酸、水杨酸存在于所有的血液样本中;儿茶素、N,N-bis-dhc-spermidine-Hex、dhc-caffeoyl-spermidine-Hex和N1,N10-bis-(dihydrocaffeoyl)spermidine经过肠道吸收后可以检测到,但经过肝脏后却消失了,说明这些化合物主要被肝脏代谢清除了。山柰酚芸香苷、quercetin-O-Rut-Hex和矮牵牛素-3-O-芸香苷经过肠道后未检测到,后经过肝脏又重新出现,其在综合代谢的血液样本中也未检测到,说明其经过肠道被代谢,后经过肝代谢重新生成。另外这3个化合物存在被胃液降解或肠道菌群代谢的可能。Homovanillic Acid Hexose在灌流的血液样本中可以检测到,但是经综合代谢的血液样本未检测到,推测其灌胃给药后,有可能被胃液降解或肠道菌群代谢。将表2中的原形入血成分作为枸杞子质量控制成分。
  3 讨论
  本研究采用在体双向肠灌流技术和灌胃采血技术相结合的方法,有以下优点:1)该技术可以发现血中与药效相关的潜在活性原形成分,并可溯源至药材中对应的化学成分;2)该技术可以阐明原形成分和代谢成分在不同部位的代谢动态转移;3)该技术通过应用高灵敏度检测器、大量供血循环灌流和SPE血浆制备方法三维组合,可以更大程度避免漏检体内入血成分的情况。
  由研究结果可知,枸杞子提取物经LC-MS分析,共鉴定出36个化学成分。序贯代谢研究表明,枸杞子中有20个原形入血成分,其中有17个成分在经过肠代谢后可以检测到,16个成分在经过肝代谢后可以检测到,11个成分经过灌胃给药后,在腹主动脉血中可以检测到。其中综合代谢的11个成分在肝代谢的血液样本中均可以检测到。中药中的原形入血成分和代谢成分均能发挥药效作用,但是在本研究中未考虑代谢成分的药效作用,原因有以下几点:1)一个化学成分会有多种代谢产物,有的则高达50种甚至100种以上的代谢产物,任务量大;2)有研究表明[12],经结构鉴定后确认的原形成分占所有血中移行成分的28%,而代谢产物仅占所有血中移行成分的3.8%,因此暂不考虑代谢成分的活性,可以将这11个成分作为枸杞子药材的候选指标性成分。综上所述,该研究可以为枸杞子品质评价标准的制定提供合理的依据,也可以为枸杞子药效和药理作用机制研究以及相应药品和食品的研发提供参考。
  参考文献
  [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2015:249-249.
  [2]Potterat O.Goji(Lycium barbarum and L.chinense):phytochemistry,pharmacology and safety in the perspective of traditional uses and recent popularity[J].Planta Med,2010,76(1):7-19.
  [3]房方,李祥,陈建伟.中药血清药物化学的研究进展[J].亚太传统医药,2009,5(1):143.

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